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簡(jiǎn)體中文新方法 | 一種衍生條件測(cè)定磺酰氯中磺酸的檢測(cè)方法
磺酰氯主要分為脂肪族磺酰氯和芳香族磺酰氯。芳香族磺酰氯的來(lái)源有以下幾類(lèi)：
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由硫酚，各種硫醚在酸性溶劑中導(dǎo)入氯氣制得；
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芳香磺酸類(lèi)化合物在氯化試劑作用下形成；
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磺化反應(yīng)。脂肪族磺酰氯的來(lái)源主要是硫醇或相關(guān)衍生物氯代或氧化[1]。
在合成工藝中不可避免產(chǎn)生磺酸類(lèi)的雜質(zhì)。當(dāng)前文獻(xiàn)中磺酰氯類(lèi)化合物磺酸檢測(cè)方法有：
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正相高效液相色譜法[2]，但磺酸類(lèi)雜質(zhì)在純有機(jī)相中不易溶解，該方法存在較大局限性；
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常規(guī)反相高效液相色譜法[3]，該方法磺酰氯類(lèi)化合物易遇水反應(yīng)生成磺酸類(lèi)化合物。易造成檢測(cè)結(jié)果偏高。
常規(guī)磺酸類(lèi)雜質(zhì)在磺酰氯中檢測(cè)方法，有以下局限：
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磺酸類(lèi)化合物極性大，在液相色譜中保留能力較弱，易受空白溶劑干擾；
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磺酸類(lèi)化合物峰形易受稀釋劑影響，容易產(chǎn)生溶劑效應(yīng)；
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磺酰氯類(lèi)化合物穩(wěn)定性較差，易遇水反應(yīng)生成磺酸類(lèi)化合物，常規(guī)高效液相色譜法流動(dòng)相中大多含有水，會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。
針對(duì)上述問(wèn)題，本文以3-甲基-8-喹啉磺酰氯為例，開(kāi)發(fā)出了一種采用氨水衍生的方法，用氨水衍生3-甲基-8-喹啉磺酰氯，形成比較穩(wěn)定的酰胺，酰胺在水中不易降解成3-甲基-8-喹啉磺酸，并且3-甲基-8-喹啉磺酸與氨水在常規(guī)條件下不易生成酰胺（如下圖所示），從而準(zhǔn)確測(cè)定其中含有的磺酸，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，證明該方法可準(zhǔn)確有效地檢測(cè)3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的雜質(zhì)3-甲基-8-喹啉磺酸。
從上圖中可以看出，磺酸與磺酰氯衍生物磺酰胺分離度良好，且磺酸類(lèi)雜質(zhì)不與氨水反應(yīng)生成酰胺，該方法可準(zhǔn)確有效地檢測(cè)磺酰氯化合物中磺酸類(lèi)雜質(zhì)。
高效液相色譜儀（waters、安捷倫）、電子天平（梅特勒XS105、奧豪斯ARRW60）
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試藥：3-甲基-8-喹啉磺酰氯（北京孚眾科技有限公司）、3-甲基-8-喹啉磺酸（北京康派森醫(yī)藥科技有限公司）。
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試劑：磷酸二氫鉀（分析純，來(lái)源北京福晨科技有限公司）、庚烷磺酸鈉（分析純，來(lái)源麥克林生化試劑有限公司）、乙腈（色譜純、來(lái)源Fisher）、超純水（自制）。
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色譜條件
1）色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑
2）流動(dòng)相A：10mmol/L磷酸二氫鉀溶液和2.5mmol/L庚烷磺酸鈉溶液（取磷酸二氫鉀1.36g，1-庚烷磺酸鈉0.51g，加水1000ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5）
3）流動(dòng)相B：乙腈
4）檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm
5）流速：1.0ml/min
6）柱溫：30℃
7）進(jìn)樣量：20μl
8）洗脫梯度：
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溶液配制
1）對(duì)照品溶液：取3-甲基-8-喹啉磺酸適量，精密稱(chēng)定，加40%乙腈溶解并稀釋制成每1ml含25μg的溶液。
2）供試品溶液：取3-甲基-8-喹啉磺酰氯約10mg，精密稱(chēng)定，置西林瓶中，加乙腈1ml和濃氨水0.05ml，振搖至完全反應(yīng)，析出結(jié)晶，減壓干燥至干后，加入乙腈8ml，水4ml溶解，轉(zhuǎn)移至20ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
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測(cè)定法
精密量取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
計(jì)算公式：
注：W對(duì)：對(duì)照品溶液稱(chēng)樣量，mg； W供試品：供試品稱(chēng)樣量，mg； A對(duì)：對(duì)照品溶液色譜圖中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面積； A雜質(zhì)：供試品溶液色譜圖中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面積； V對(duì)：對(duì)照品溶液的稀釋倍數(shù)； V供試品：供試品溶液的稀釋倍數(shù)。
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專(zhuān)屬性
對(duì)照品溶液中3-甲基-8-喹啉磺酸各色譜參數(shù)符合要求，空白溶劑不干擾3-甲基-8-喹啉磺酸檢測(cè)，專(zhuān)屬性良好。
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靈敏度試驗(yàn)
取3-甲基-8-喹啉磺酸適量，精密稱(chēng)定，加40%乙腈溶解后，用40%乙腈逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥啥肯藜皺z測(cè)限溶液，分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。當(dāng)峰高約為基線(xiàn)噪音的3倍或2倍，即為檢測(cè)限；當(dāng)峰高約為基線(xiàn)噪音的10倍時(shí)，即為定量限，結(jié)果如下表。
靈敏度試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：3-甲基-8-喹啉磺酸定量限小于報(bào)告限度（0.05%）的50%，檢測(cè)限小于定量限的0.5倍，方法靈敏度符合要求。
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進(jìn)樣精密度試驗(yàn)
取定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，照擬定方法檢測(cè)，考察進(jìn)樣精密度，記錄色譜圖，結(jié)果如下表。
進(jìn)樣精密度試驗(yàn)
結(jié)論：定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，峰面積RSD＜5.0%，保留時(shí)間RSD＜2.0%，進(jìn)樣精密度符合要求。
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線(xiàn)性試驗(yàn)
取3-甲基-8-喹啉磺酸適量，精密稱(chēng)定，加40%乙腈溶解后，分別定量稀釋配制成10%、5%、2%、1%、0.1%和0.001%的溶液，照擬定方法檢測(cè)，記錄色譜圖，結(jié)果如下表。
線(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：3-甲基-8-喹啉磺酸在0.01~51.35μg/ml濃度范圍內(nèi)，R2＞0.999，濃度與峰面積之間線(xiàn)性關(guān)系良好。
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準(zhǔn)確度試驗(yàn)
用3-甲基-8-喹啉磺酸對(duì)照品配制0.5%、2%、5%、10%加樣回收率溶液，來(lái)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，測(cè)得3-甲基-8-喹啉磺酸的回收率在93.00%~105.80%范圍內(nèi)，平均回收率為99.4%，方法準(zhǔn)確度較高。
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耐用性試驗(yàn)
本方法在流速0.8~1.2ml/min、柱溫25~35℃、流動(dòng)相A pH4.3~4.7、緩沖鹽濃度在8~12mmol/L范圍內(nèi)，使用不同廠(chǎng)牌色譜柱和不同儀器，對(duì)照品溶液色譜峰各色譜參數(shù)均符合要求；供試品中3-甲基-8-喹啉磺酸檢出量無(wú)明顯差異；空白溶劑均不干擾檢測(cè)，耐用性良好。
該衍生方法反應(yīng)速度快，條件溫和，便于實(shí)現(xiàn)。
通過(guò)全面的方法學(xué)驗(yàn)證，證明該方法具有專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，可準(zhǔn)確有效地檢測(cè)3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的雜質(zhì)3-甲基-8-喹啉磺酸。
參考文獻(xiàn)：
[1] 張國(guó)柱.經(jīng)典化學(xué)合成反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)操作-磺酰氯合成法[DB/OL]
[2] 張亞梅.HPLC法測(cè)定藥物中間體5-磺酰氯異喹啉含量及有關(guān)物質(zhì)[J].世界家苑2018年第09期
[3] 勾新磊，趙鐵禪等.UPLC-MS/MS法測(cè)定阿加曲班中4個(gè)基因毒性雜質(zhì)[J].藥物分析雜質(zhì)2019年第11期
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