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液相色譜柱的驗(yàn)收,維護(hù)和保養(yǎng)

發(fā)布人:Agilent 發(fā)布時(shí)間:2021-10-08

分析儀器是藥物的研發(fā)、臨床試驗(yàn)到質(zhì)量控制的重要工具和手段,液相色譜分析是眾多儀器分析方法中的重中之重。液相色譜柱在色譜分析系統(tǒng)中主要起著核心分離作用,如同色譜系統(tǒng)的心臟,同時(shí)也是易損耗品。為了減少損耗,液相色譜柱的驗(yàn)收,維護(hù)和保養(yǎng)是每個(gè)色譜分析實(shí)驗(yàn)室必須建立的管理制度,同時(shí)也是從業(yè)人員需要積累和修煉的基本技能。 
 

本文主要針對(duì)液相色譜柱使用過(guò)程常用問(wèn)題進(jìn)行探討。
 


 

色譜柱的連接
 

色譜柱安裝方向:

色譜柱安裝應(yīng)按照同一個(gè)方向連接使用,且需要按照色譜柱上的方向指示連接,盡量避免色譜柱反向連接!



 

常見(jiàn)色譜柱連接的問(wèn)題

?  安裝色譜柱時(shí)管線伸出接頭長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng),使得螺紋擰入較淺,會(huì)導(dǎo)致密封性不好而漏液,進(jìn)一步引起基線漂移或響應(yīng)降低;

? 安裝色譜柱時(shí)管線伸出接頭長(zhǎng)度過(guò)短,會(huì)在管線前段出現(xiàn)死體積,引起峰形展寬,靈敏度降低。
 

※ 理想的接頭連接應(yīng)具備以下特性:

?  管線與接口之間無(wú)死體積; 

?  在超高壓和高溫下始終避免泄漏; 

?  優(yōu)異的長(zhǎng)期使用穩(wěn)定性,防止管線滑動(dòng); 

?  簡(jiǎn)便易用。

選擇合適的接頭?

 

※ 管線的選擇:

分析型液相系統(tǒng)最常用的規(guī)格是0.12和0.17mm內(nèi)徑的管線。更換管線時(shí)首先要確認(rèn)當(dāng)前管線的規(guī)格、并更換相同內(nèi)徑和長(zhǎng)度的管線,否則會(huì)造成更換前后結(jié)果的不一致,因?yàn)楣芫€體積會(huì)影響系統(tǒng)柱外體積,從而影響峰形和保留時(shí)間。


 

反相柱活化平衡
 

首先,使用甲醇或乙腈沖洗約20 倍柱體積 。

柱體積計(jì)算?

若流動(dòng)相含有緩沖鹽,使用與流動(dòng)相中初始比例相等比例的超純水和有機(jī)相沖洗過(guò)渡約20 倍柱體積,再用含緩沖鹽的流動(dòng)相平衡沖洗約20 倍柱體積或以上。

若流動(dòng)相不含緩沖鹽,可直接用流動(dòng)相平衡色譜柱,大約20 倍柱體積或以上。

當(dāng)基線和壓力平穩(wěn)后測(cè)試,判斷是否充分平衡以連續(xù)進(jìn)樣結(jié)果的重現(xiàn)為準(zhǔn)。若不夠可延長(zhǎng)流動(dòng)相的平衡時(shí)間。

 

反相柱沖洗保存
 

使用50:50 甲醇或乙腈與水的混合溶液沖洗20-30 倍的柱體積;

使用純甲醇或乙腈沖洗20-30倍柱體積;

儲(chǔ)存之前將堵頭緊緊密封在柱端接頭上,以免填料變干。


反相色譜柱清洗再生
 

色譜柱在使用過(guò)程中因?yàn)闃悠坊蛘吡鲃?dòng)相帶來(lái)物理顆粒或者化學(xué)吸附,引起色譜柱的污染,這時(shí)會(huì)在色譜圖上有明顯的變化。出現(xiàn)色譜柱污染時(shí),清洗或反沖清洗則需要根據(jù)色譜柱的特性進(jìn)行操作。清洗或反沖清洗反相色譜柱時(shí),用以下溶劑至少各30倍柱體積沖洗。
 

例如:柱污染導(dǎo)致的峰分叉

斷開(kāi)色譜柱與檢測(cè)器的連接,將管線留在色譜柱末端,將其放入接收液體的燒杯中,先用不含緩沖液鹽的流動(dòng)相沖洗(水/有機(jī)相),然后用 100% 有機(jī)相(甲醇和乙腈)沖洗,檢查壓力是否回歸正常,如果沒(méi)有,再進(jìn)行下一步操作。如壓力沒(méi)有回歸正常,丟棄色譜柱或考慮用更強(qiáng)的條件清洗:75% 乙腈/25% 異丙醇、100% 異丙醇、100% 二氯甲烷 、100% 己烷。值得注意的是,無(wú)論是使用己烷還是二氯甲烷,使用之前或恢復(fù)使用反相流動(dòng)相之前必須用異丙醇進(jìn)行沖洗。
 

色譜柱反沖
 

雖然色譜柱不應(yīng)輕易反沖,但當(dāng)明確知道超壓來(lái)自顆粒物堵塞篩板或柱頭污染時(shí),反沖是最有效補(bǔ)救方法。反沖色譜柱可使顆粒物快速被沖出,此外還可快速?zèng)_出柱頭強(qiáng)吸附污染物,柱子反沖后最好仍然正向連接使用。不過(guò),反沖也會(huì)帶來(lái)負(fù)面影響,如可能導(dǎo)致柱床松動(dòng)、發(fā)生保留時(shí)間改變、小粒徑的色譜柱反沖可能導(dǎo)致填料流出等。 

?  可以反沖的色譜柱有:粒徑大于2um的色譜柱(2.7、3、3.5、4、5μm等);

? 不可反沖的色譜柱有:粒徑小于2um的色譜柱(1.8μm RRHD/RRHT;1.9μm Poroshell)。

 

色譜柱使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題
 

液相色譜柱使用過(guò)程中最常見(jiàn)的問(wèn)題包括pH值、溫度、溶劑耐受、壓力、樣品等。色譜柱使用條件不得超出廠家建議的范圍,包括最高壓力,pH范圍,水相耐受,柱溫等。當(dāng)測(cè)試條件接近色譜柱使用范圍的極限值時(shí),柱壽命會(huì)受影響。

超范圍使用C18柱,拖尾-永久破壞 

 


 

根據(jù)pH選擇合適的色譜柱(以Poroshell 120系列為例)
 


 

建立色譜柱使用記錄
 

色譜柱是有生命周期的色譜分析關(guān)鍵耗材。為了保障色譜柱的正確使用,提高每一根色譜柱的產(chǎn)出,實(shí)驗(yàn)室需要給每根色譜柱建立檔案,對(duì)其從購(gòu)入到每次使用情況進(jìn)行真實(shí)的記錄,保障規(guī)范使用,同時(shí)為質(zhì)量管理體系建設(shè)提供原始的資料。

色譜柱的檔案的記錄要點(diǎn)和參考表格如下,實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)項(xiàng)目特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化:
 


 

信息來(lái)源:以上內(nèi)容來(lái)源于安捷倫技術(shù)報(bào)告整理而成
 

關(guān)于安捷倫

安捷倫科技公司(紐約證交所:A)是生命科學(xué)、診斷和應(yīng)用化學(xué)市場(chǎng)領(lǐng)域的全球領(lǐng)導(dǎo)者,致力于提供敏銳洞察與創(chuàng)新,幫助提高生活質(zhì)量。我們的儀器、軟件、服務(wù)、解決方案和專(zhuān)家能夠?yàn)榭蛻糇罹咛魬?zhàn)性的難題提供更可靠的答案。在 2020 財(cái)年,安捷倫的營(yíng)業(yè)收入為 53.4 億美元,全球員工數(shù)為 16400 人。如需了解安捷倫公司的詳細(xì)信息,請(qǐng)?jiān)L問(wèn) www.agilent.com。
 

-END-
 

關(guān)于我們:

北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司分析測(cè)試中心擁有一千平米的專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室,配備藥物分析領(lǐng)域的各種高端儀器設(shè)備40余臺(tái),主要包括電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)、液質(zhì)聯(lián)用儀(LC-MS/MS)、氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS/MS和GC-MS)、離子色譜儀(IC)、差示掃描量熱儀(DSC)、紅外光譜(IR)、高效液相色譜(HPLC,配備電噴霧檢測(cè)器CAD)和氣相色譜儀(GC)等。該中心不僅通過(guò)了ISO9001質(zhì)量管理體系認(rèn)證,并且即將獲得CNAS認(rèn)可資質(zhì)。檢測(cè)數(shù)據(jù)采集和處理系統(tǒng)均具備網(wǎng)絡(luò)版審計(jì)追蹤功能,可為廣大客戶提供安全、準(zhǔn)確、可靠和可追溯的檢測(cè)數(shù)據(jù)和結(jié)果。

該中心不僅研發(fā)技術(shù)團(tuán)隊(duì)高度專(zhuān)業(yè)化,檢測(cè)技術(shù)和藥物研發(fā)經(jīng)驗(yàn)豐富,而且有非常強(qiáng)大的業(yè)界知名專(zhuān)家組成的顧問(wèn)團(tuán)隊(duì),以及與島津和賽默飛儀器公司建立的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室,可以使用世界上最先進(jìn)的儀器設(shè)備,為藥物研發(fā)企業(yè)提供專(zhuān)業(yè)、精準(zhǔn)、快速的檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。 

該中心的主要業(yè)務(wù)范圍包括:符合國(guó)家藥政法規(guī)的藥物全生命周期質(zhì)量研究、遺傳毒性雜質(zhì)檢測(cè)、痕量殘留物分析、元素雜質(zhì)檢測(cè)、藥品接觸系統(tǒng)相容性研究(藥包材、生產(chǎn)組件和給藥裝置等)、抗生素類(lèi)藥物聚合物雜質(zhì)研究、未知雜質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、難獲得雜質(zhì)質(zhì)譜研究,以及使用Derek和Sarah軟件對(duì)含有遺傳毒性警示結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)進(jìn)行毒性預(yù)測(cè)等多個(gè)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。其中,聚合物雜質(zhì)研究和難獲得雜質(zhì)質(zhì)譜檢測(cè)為業(yè)界首創(chuàng)技術(shù),可為藥物研發(fā)過(guò)程中的難點(diǎn)和痛點(diǎn)問(wèn)題提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。
 


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